您現在的位置：首頁 > 檢測項目 > 其他檢測

血培養用培養基的無菌試驗檢測

1對1客服專屬服務，免費制定檢測方案，15分鐘極速響應

可選形式：電子報告紙質報告

可選語言：中文報告英文報告

發布時間：2025-08-05 20:19:37 更新時間：2025-08-04 20:19:37

點擊：0

作者：中科光析科學技術研究所檢測中心

血培養用培養基的無菌試驗檢測：確保診斷準確性與患者安全的關鍵屏障

血培養是臨床診斷菌血癥、敗血癥等血流感染的金標準，其結果的準確性直接關系到患者的治療決策與預后。作為血培養的核心耗材，培養基本身必須絕對無菌，否則可能引入外源性微生物污染，導致假陽性結果，誤導臨床治療方向，甚至危及患者生命。因此，對血培養用培養基進行嚴格、規范的無菌試驗檢測，是臨床微生物實驗室質量管理體系的重中之重，是保障檢驗結果可靠性和患者安全的不可或缺的環節。無菌試驗旨在確認每一批次或每一生產單元內的培養基在出廠前或使用前，不含任何活的微生物（包括細菌、真菌），確保其在支持病原微生物生長的同時，自身不會成為污染源。

核心檢測項目

血培養用培養基的無菌試驗檢測主要聚焦于以下核心項目：

需氧菌和兼性厭氧菌檢測： 重點篩查常見的污染菌，如葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌、腸桿菌科細菌（大腸埃希菌、克雷伯菌屬等）、假單胞菌屬等。
專性厭氧菌檢測： 針對可能存在的厭氧菌污染，如擬桿菌屬、梭菌屬、消化鏈球菌屬等，特別是當培養基設計用于厭氧血培養時。
真菌檢測： 檢測潛在的酵母菌（如念珠菌屬）和霉菌（如曲霉屬、毛霉屬）污染。

檢測項目需根據培養基的類型（如標準需氧瓶、厭氧瓶、兒童瓶、含樹脂瓶等）及其宣稱的適用范圍進行針對性設計。

關鍵檢測儀器

無菌試驗的準確執行依賴于一系列關鍵儀器設備：

生物安全柜（BSC）或超凈工作臺： 提供無菌操作環境，防止環境微生物污染樣品或培養基，是進行無菌試驗的基礎保障設備。
恒溫培養箱： 用于在設定的溫度（通常為30-35°C用于需氧/兼性厭氧培養，部分厭氧菌需35-37°C）下孵育接種后的培養基樣本。需氧培養通常需要空氣環境。
厭氧培養裝置： 如厭氧培養箱、厭氧罐或厭氧袋，用于提供無氧環境（通常使用混合氣體，如85% N₂, 10% H₂, 5% CO₂），以檢測專性厭氧菌污染。
恒溫水浴鍋： 用于保持培養基在特定溫度（如45-50°C）下融化瓊脂或溶解成分，以便于分裝和操作。
高壓蒸汽滅菌器： 用于對試驗過程中使用的玻璃器皿、培養基稀釋液（如硫乙醇酸鹽流體培養基、胰酪大豆胨液體培養基）以及廢棄物進行徹底滅菌。
薄膜過濾系統： 當待測培養基成分可能干擾微生物生長或檢測時（如含抗菌劑、樹脂或活性炭的培養基），常采用薄膜過濾法。該系統包含無菌濾膜（孔徑通常為0.45μm）、濾器、真空泵和接收瓶。

主要檢測方法

血培養培養基無菌試驗通常遵循以下原則性方法，具體操作需依據相關標準和產品特性進行優化：

直接接種法：
- 在嚴格無菌條件下（BSC中），取規定量的待測培養基樣本（通常為培養基總體積的1%-10%），直接接種到足夠體積的無菌、廣譜液體培養基中（如硫乙醇酸鹽流體培養基用于需氧/厭氧菌檢測，胰酪大豆胨液體培養基用于真菌/需氧菌檢測）。
- 將接種后的液體培養基分別在需氧和厭氧條件下，于30-35°C培養至少14天（中國藥典等標準要求），并定期（如第3、7、14天）觀察是否有微生物生長跡象（渾濁、沉淀、菌膜、產氣等）。
- 對于固體培養基（如血瓊脂平板基礎），可通過傾注平板法或涂布法進行檢測。
薄膜過濾法：
- 該方法尤其適用于含有抑菌成分（如抗生素中和劑、樹脂、活性炭）或高營養濃度可能促進背景微生物過度生長的血培養培養基。
- 將規定量的待測培養基溶解或稀釋于適量的無菌稀釋液（如pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液）中，通過無菌濾膜（孔徑通常0.45μm）進行過濾。
- 用適量無菌稀釋液沖洗濾膜以去除可能殘留的抑菌物質。
- 將濾膜取出，正面朝上貼于相應的固體培養基（如大豆酪蛋白消化物瓊脂用于需氧菌和真菌，哥倫比亞瓊脂基礎加血用于厭氧菌）上，或將其浸沒于無菌液體培養基中。
- 在相應條件下（需氧/厭氧）培養規定時間并觀察結果。

無論采用哪種方法，均需設立陽性對照（接種已知低濃度標準菌株）和陰性對照（僅含無菌培養基或稀釋液）以驗證試驗系統的有效性。

遵循的檢測標準

血培養用培養基無菌試驗的實施需嚴格遵循國家、國際或行業制定的強制性或推薦性標準，確保檢測的規范性和結果的可接受性。主要標準包括：

《中華人民共和國藥典》（ChP）： 通則1101“無菌檢查法”是適用于藥品、生物制品、醫療器械（含體外診斷試劑如培養基）無菌檢查的法定標準。詳細規定了方法適用性試驗（抑菌性測試）、直接接種法和薄膜過濾法的具體操作步驟、培養基要求、培養條件（溫度、時間、需氧/厭氧）、觀察頻率、結果判定規則以及驗證要求。
ISO 11133:2014《微生物學培養基制備、生產、貯存和性能測試》： 該國際標準是培養基質量控制的核心標準，其第7部分“無菌性測試”專門規定了培養基無菌試驗的要求，包括取樣計劃、檢測方法的選擇（著重推薦薄膜過濾法）、培養條件（溫度、時間、氣氛）、結果觀察和判定。
ISO 11737-1:2018《醫療保健產品滅菌微生物學方法第1部分：產品上微生物總數的測定》： 雖然主要針對滅菌產品，但其無菌檢測的理念和方法（特別是薄膜過濾法）對培養基無菌試驗有重要參考價值。
制造商內部質量標準： 培養基生產商通常會根據ChP、ISO等標準，結合產品特性和生產工藝，制定更為具體和嚴格的內部無菌試驗操作規程和驗收標準（如無菌保證水平SAL）。
《醫療器械生產質量管理規范》（GMP）及相關附錄： 對體外診斷試劑（包括培養基）的生產環境、工藝控制、檢驗放行（含無菌檢驗）提出了全面的質量管理體系要求。

綜上所述，血培養用培養基的無菌試驗檢測是一項涉及多項目、依賴精密儀器、遵循嚴格標準方法的系統性質量控制活動。通過科學嚴謹的檢測，確保每一瓶血培養培養基都處于絕對無菌狀態，是保障血流感染病原學診斷準確性、指導合理抗生素應用、最終維護患者生命健康的基石。實驗室和生產商必須高度重視并持續投入資源，確保該關鍵檢測環節的有效執行。