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水生動物及其產(chǎn)品病毒性神經(jīng)壞死病檢測

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發(fā)布時間：2025-10-22 21:02:02 更新時間：2025-10-21 21:02:03

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作者：中科光析科學技術(shù)研究所檢測中心

水生動物及其產(chǎn)品病毒性神經(jīng)壞死病檢測

病毒性神經(jīng)壞死病（Viral Nervous Necrosis，VNN）是由神經(jīng)壞死病毒（NNV）引起的一種嚴重危害水生動物健康的病毒性疾病，主要感染海水和淡水魚類，尤其是仔魚和幼魚階段易感性最高。該病以神經(jīng)系統(tǒng)損傷為主要特征，患病個體常表現(xiàn)出異常游動、螺旋狀翻滾、體色變暗、食欲減退等癥狀，嚴重時可在短時間內(nèi)導致大規(guī)模死亡，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。由于病毒可通過垂直傳播（親魚攜帶病毒傳染給后代）和水平傳播（水體、飼料、器械等媒介）擴散，且感染后尚無有效治療方法，因此早期、準確的檢測對于疫情預警、種苗健康管理和國際貿(mào)易檢疫至關(guān)重要。對水生動物活體、卵、精液以及加工產(chǎn)品（如冷凍魚片）進行病毒性神經(jīng)壞死病的病原檢測，是防控該病蔓延的核心環(huán)節(jié)。

檢測項目

病毒性神經(jīng)壞死病的檢測項目主要圍繞病原體——神經(jīng)壞死病毒的識別和確認展開。核心檢測項目包括：病毒核酸檢測，旨在直接檢測病毒基因組的存在，這是確認感染的黃金標準；病毒抗原檢測，通過識別病毒特異性蛋白來指示感染狀態(tài)，適用于快速篩查；病毒分離與培養(yǎng)，通過將樣本接種到敏感細胞系中觀察細胞病變效應，從而驗證病毒的活性，但該方法耗時較長；血清學檢測，用于檢測魚類體內(nèi)針對NNV的特異性抗體，可反映歷史感染或免疫狀況，常用于流行病學調(diào)查。此外，對于加工產(chǎn)品，還需評估病毒在加工過程中的存活能力，確保產(chǎn)品安全性。

檢測儀器

進行病毒性神經(jīng)壞死病檢測需要一系列精密的實驗室儀器。核心儀器包括：實時熒光定量PCR儀，用于高靈敏度、定量地檢測病毒核酸，是當前最常用的分子診斷工具；PCR基因擴增儀，用于常規(guī)的病毒核酸擴增；凝膠成像系統(tǒng)，用于觀察PCR擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果；酶標儀，在進行酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等血清學檢測時，用于讀取吸光度值以定量分析抗原或抗體；生物安全柜，為病毒操作提供無菌環(huán)境，防止交叉污染和人員感染；細胞培養(yǎng)箱，用于病毒分離培養(yǎng)時維持特定溫度、濕度和CO?濃度；高速冷凍離心機，用于快速分離樣本中的病毒顆粒或核酸；以及超低溫冰箱，用于長期保存病毒標準品、核酸提取物和臨床樣本。

檢測方法

病毒性神經(jīng)壞死病的檢測方法多樣，可根據(jù)檢測目的和樣本類型選擇適宜的技術(shù)。分子生物學方法是目前的主流，尤其是實時熒光定量RT-PCR法，該方法通過反轉(zhuǎn)錄將病毒RNA轉(zhuǎn)化為cDNA，再進行特異性擴增和熒光信號檢測，具有靈敏度高、特異性強、可定量且快速的優(yōu)點，適用于大批量樣本的篩查和確診。常規(guī)RT-PCR法結(jié)合凝膠電泳也可用于定性檢測，但靈敏度相對較低。細胞培養(yǎng)法是傳統(tǒng)的病毒分離方法，將組織勻漿液接種到SSN-1等易感細胞系，觀察特征性的細胞病變，可確認活病毒的存在，但周期需數(shù)天至數(shù)周。免疫學方法如ELISA，利用特異性抗體捕獲病毒抗原，操作簡便，適合現(xiàn)場快速初篩，但靈敏度和特異性可能低于分子方法。對于組織病理學檢查，可通過切片染色在顯微鏡下觀察腦、視網(wǎng)膜等神經(jīng)組織的空泡化壞死病變，作為輔助診斷依據(jù)。在選擇方法時，常結(jié)合多種技術(shù)相互驗證，以確保結(jié)果的準確性。