豬組織/血液/精液/細胞培養物/鼻拭子豬偽狂犬病病毒核酸檢測
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發布時間:2025-09-25 02:55:41 更新時間:2025-09-24 02:55:41
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作者:中科光析科學技術研究所檢測中心
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豬偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是由豬偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病,對養豬業造成嚴重經濟損失。核酸檢測作為PRV診斷的核心技術,具有靈敏度高、特異性強的特點,能夠早期發現潛伏感染和帶毒狀態,為疫病防控提供重要依據。
目前核酸檢測可應用于多種樣本類型,包括豬組織(扁桃體、腦、肺等)、血液(全血或血清)、精液、細胞培養物以及鼻拭子等臨床樣本。不同樣本的采集和處理方法直接影響檢測結果的準確性,需要根據檢測目的選擇適宜的樣本類型。
豬偽狂犬病病毒核酸檢測主要包括以下項目:
1. PRV基因組DNA定性檢測:確定樣本中是否存在PRV特異性核酸序列,是診斷感染的基本依據。
2. PRV載量定量分析:通過實時熒光定量PCR測定病毒拷貝數,評估感染程度和排毒水平。
3. 基因分型檢測:針對gB、gC、gD等重要基因進行測序分析,追蹤病毒變異和流行毒株特征。
4. 疫苗株與野毒株鑒別:通過特異性引物設計區分疫苗免疫和自然感染。
1. 核酸提取設備:包括自動核酸提取儀、離心機、渦旋混合器等,用于樣本前處理。
2. PCR擴增系統:常規PCR儀、實時熒光定量PCR儀(如ABI 7500、Bio-Rad CFX96等)。
3. 電泳系統:用于PCR產物分析的凝膠成像系統、電泳槽和電源。
4. 測序設備:Sanger測序儀或二代測序平臺,用于基因分型和變異分析。
5. 生物安全設備:二級生物安全柜、-80℃超低溫冰箱等樣本保存設備。
1. 常規PCR法:針對PRV gB、gD等保守基因設計特異性引物,通過擴增和電泳檢測目標片段。
2. 實時熒光定量PCR:采用TaqMan探針或SYBR Green染料法,實現核酸的絕對定量檢測。
3. 多重PCR技術:同時檢測PRV與其他豬病病原體,提高檢測效率。
4. 數字PCR技術:通過微滴分區實現絕對定量,特別適用于低載量樣本檢測。
5. 等溫擴增技術:如LAMP法,無需熱循環儀,適合現場快速篩查。
檢測過程中需設立陽性對照、陰性對照和空白對照,嚴格防止交叉污染。對于精液等復雜樣本,需要優化核酸提取方法去除抑制物;鼻拭子樣本應注意采集時機和部位以獲得足夠的上皮細胞。
證書編號:241520345370
證書編號:CNAS L22006
證書編號:ISO9001-2024001

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