豬組織/血液/精液/細(xì)胞培養(yǎng)物/鼻拭子豬圓環(huán)病毒核酸檢測(cè)
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發(fā)布時(shí)間:2025-09-25 02:55:08 更新時(shí)間:2025-09-24 02:55:08
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作者:中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心
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豬圓環(huán)病毒(PCV)是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重要病原體,可引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)、豬皮炎腎病綜合征(PDNS)等多種疾病。隨著養(yǎng)豬業(yè)規(guī)模化發(fā)展,病毒檢測(cè)在疫病防控中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。核酸檢測(cè)因其高靈敏度和特異性,已成為當(dāng)前PCV診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。通過對(duì)豬只不同組織樣本的精準(zhǔn)檢測(cè),可及時(shí)掌握豬群感染狀況,為制定科學(xué)的防控策略提供依據(jù)。
根據(jù)臨床需求,實(shí)驗(yàn)室通常接收以下類型樣本:血液樣本(抗凝血或血清)、淋巴結(jié)/脾臟等組織樣本、精液樣本(種公豬監(jiān)測(cè))、細(xì)胞培養(yǎng)物(病毒分離培養(yǎng))以及鼻拭子樣本(活體篩查)。不同樣本的病毒載量存在差異,采樣時(shí)應(yīng)根據(jù)檢測(cè)目的選擇合適樣本,并確保采樣過程規(guī)范,避免交叉污染。
現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室主要配備:實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(可同時(shí)檢測(cè)PCV1/PCV2/PCV3型)、核酸提取工作站(實(shí)現(xiàn)樣本前處理自動(dòng)化)、電泳系統(tǒng)(用于常規(guī)PCR產(chǎn)物分析)、生物安全柜(保障操作安全)以及超低溫冰箱(樣本及試劑保存)。部分高端實(shí)驗(yàn)室還配置數(shù)字PCR系統(tǒng),可進(jìn)行絕對(duì)定量分析。
1. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法:采用TaqMan探針技術(shù),針對(duì)PCV保守ORF2基因設(shè)計(jì)特異性引物,通過循環(huán)閾值(Ct值)判斷病毒載量。該方法靈敏度可達(dá)10拷貝/μL,4小時(shí)內(nèi)可完成檢測(cè)。
2. 多重PCR檢測(cè):通過優(yōu)化引物體系,單次反應(yīng)可同時(shí)鑒別PCV不同基因型,特別適用于混合感染情況的診斷。結(jié)果需通過凝膠電泳分析條帶大小進(jìn)行判讀。
3. 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP):無需復(fù)雜儀器,在63℃恒溫條件下1小時(shí)即可完成擴(kuò)增,適合基層現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。通過濁度變化或顯色反應(yīng)判斷結(jié)果。
4. 數(shù)字PCR技術(shù):采用微滴分割原理,可實(shí)現(xiàn)絕對(duì)定量,特別適用于低病毒載量樣本和疫苗效價(jià)評(píng)估,但成本較高。
實(shí)驗(yàn)過程需設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照(PCV標(biāo)準(zhǔn)品)、陰性對(duì)照(無核酸水)和提取對(duì)照(監(jiān)控提取效率)。每批次檢測(cè)應(yīng)包含內(nèi)參基因(如β-actin)驗(yàn)證樣本質(zhì)量。對(duì)于臨界值結(jié)果,建議重復(fù)檢測(cè)或采用另一種方法驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期參加能力驗(yàn)證,確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。
證書編號(hào):241520345370
證書編號(hào):CNAS L22006
證書編號(hào):ISO9001-2024001

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