微生物計數檢測
微生物計數檢測是藥品、食品、化妝品、飲用水、環境樣品及醫療器械等眾多領域質量控制和安全評估的核心環節。其核心目的是定量測定樣品中存活的特定微生物(如細菌、酵母菌、霉菌)的數量,通常以菌落形成單位(CFU)、最可能數(MPN)或其他等效單位表示結果。這項檢測對于評估產品受微生物污染的程度、生產過程衛生控制的有效性、原材料或成品的生物負載、消毒滅菌效果以及是否符合相關法規限值至關重要。準確可靠的微生物計數結果是保障消費者健康安全、防止產品腐敗變質、確保臨床用藥安全以及支撐環境監測決策不可或缺的科學依據。
主要檢測項目
微生物計數檢測通常根據檢測目標微生物的種類和特性進行項目劃分,主要包括:
- 需氧菌總數計數:反映樣品中所有在好氧條件下、在特定培養基和溫度下能生長形成可見菌落的細菌和酵母菌的總數。
- 霉菌和酵母菌總數計數:專門針對樣品中霉菌和酵母菌的定量測定。
- 特定致病菌或指示菌計數:如大腸埃希菌、耐膽鹽革蘭氏陰性菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌等特定目標菌的定量或定性定量檢測(MPN法常用于此)。
- 特定環境微生物計數:如潔凈室/區的沉降菌、浮游菌、表面微生物監測等。
常用檢測儀器
微生物計數檢測的精確性和效率高度依賴于專業的儀器設備:
- 培養箱:提供微生物生長所需的恒定溫度(如30-35°C用于細菌計數,20-25°C用于霉菌酵母計數)。
- 生物安全柜/超凈工作臺:提供無菌操作環境,防止樣品污染和人員暴露。
- 高壓滅菌鍋:對培養基、稀釋液、器械等進行滅菌。
- 菌落計數器:手動(帶放大鏡和計數筆的暗視野儀)或自動/半自動(圖像識別)用于準確計數平皿上的菌落。
- 均質器/拍打式均質器:用于固體或半固體樣品的均勻分散,釋放微生物。
- 膜過濾裝置:用于液體樣品的薄膜過濾法,特別適用于抑菌性樣品或微生物數量較低的樣品。
- 顯微鏡:用于觀察和初步鑒定微生物形態。
- 快速微生物檢測系統:如基于ATP生物發光、流式細胞術、阻抗法、比色法等原理的儀器,可縮短檢測時間。
- pH計:調節培養基和稀釋液的pH值。
核心檢測方法
微生物計數主要依賴于培養法,依據不同的樣品性質和微生物特性選擇合適的方法:
- 平皿傾注法:將一定量的樣品或稀釋液與熔化的瓊脂培養基混合,傾注至平皿中,凝固后培養計數菌落(CFU)。適用于大多數樣品。
- 平皿涂布法:將樣品或稀釋液均勻涂布在已凝固的瓊脂平板表面,培養后計數表面生長的菌落(CFU)。適用于對溫度敏感或需氧要求高的微生物。
- 薄膜過濾法:樣品溶液通過孔徑≤0.45μm的微孔濾膜過濾,微生物被截留在膜上,將濾膜轉移到固體培養基上培養計數(CFU),或置于液體培養基中進行MPN測定。尤其適用于大體積水樣、注射劑等無菌或低菌量樣品,以及具有抑菌性的樣品。
- 最可能數法:將樣品制成一系列稀釋度,分別接種到多管液體培養基中,根據各稀釋度管中微生物生長的陽性管數,查MPN統計表得出樣品中目標微生物的最可能數量(MPN/g或MPN/mL)。常用于大腸菌群、大腸埃希菌等特定菌的計數或確證,特別適用于微生物分布不均的樣品或目標微生物濃度較低時。
遵循的檢測標準
微生物計數檢測必須嚴格遵循國家、國際或行業公認的標準方法,以確保結果的準確性、可靠性和可比性。主要標準體系包括:
- 《中華人民共和國藥典》 (ChP):特別是通則1105(非無菌產品微生物限度檢查:微生物計數法)和1106(非無菌產品微生物限度檢查:控制菌檢查法,含MPN法)是藥品檢測的核心依據。
- 國際標準(ISO):
- ISO 4833-1: 食品和動物飼料的微生物學 - 菌落總數計數技術 - 第1部分:30°C時菌落計數技術(傾注法)。
- ISO 21528-2: 食品和動物飼料的微生物學 - 腸桿菌科檢測和計數的水平方法 - 第2部分:菌落計數技術。
- ISO 16266: 水質 - 銅綠假單胞菌檢測和計數。
- ISO 9308-1: 水質 - 大腸桿菌和大腸菌群計數 - 第1部分:低菌落背景水樣的薄膜過濾法。
- ISO 7218: 食品和動物飼料的微生物學 - 微生物學檢驗的一般要求和指南(涵蓋通用原則)。
- 國家標準(GB):
- GB 4789.2: 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定。
- GB 4789.3: 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數(含MPN法和平板計數法)。
- GB/T 5750.12: 生活飲用水標準檢驗方法 微生物指標(含細菌總數、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌等的檢驗)。
- GB 15979: 一次性使用衛生用品衛生標準(附錄含微生物檢測方法)。
- 美國藥典 (USP) <61>: 非無菌產品的微生物檢查:微生物計數試驗。
- 美國食品藥品監督管理局 Bacteriological Analytical Manual (BAM): 食品微生物檢測的官方方法。
- 行業標準和規范: 如醫療器械行業標準、化妝品衛生規范等中規定的特定微生物計數方法。
選擇和執行標準時,需充分考慮樣品的性質、目標微生物、檢測目的以及法規符合性要求。標準的更新也需及時關注并采用。
CMA認證
檢驗檢測機構資質認定證書
證書編號:241520345370
有效期至:2030年4月15日
CNAS認可
實驗室認可證書
證書編號:CNAS L22006
有效期至:2030年12月1日
ISO認證
質量管理體系認證證書
證書編號:ISO9001-2024001
有效期至:2027年12月31日