6OHDA大鼠PD模型

6-OHDA的化學結(jié)構(gòu)類似于多巴胺，可被攝入到神經(jīng)元內(nèi)導(dǎo)致多巴胺能神經(jīng)元的死亡，不透過血腦屏障，需要腦內(nèi)注射。6-OHDA制作PD動物模型涉及的毒理機制為：（1）6-OHDA引起大規(guī)模氧化應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致神經(jīng)損傷；（2）6-OHDA可抑制線粒體呼吸酶復(fù)合體活性從而抑制其呼吸鏈的功能，進而引起細胞凋亡；（3）6-OHDA注入黑質(zhì)紋狀體內(nèi)介導(dǎo)炎性反應(yīng)使之出現(xiàn)損傷；（4）6-OHDA可同時影響其他基底神經(jīng)節(jié)的代謝活動并導(dǎo)致細胞內(nèi)Ca2+的超載。Ungerstedt等向大鼠腦內(nèi)注射6-OHDA后成功建立了PD動物模型。6-OHDA應(yīng)用于小鼠、狗、貓、猴等也可建立PD動物模型，但敏感性各有差異，大鼠最敏感也最常用。選擇不同的注射部位、劑量和濃度，可制成完全損傷和部分損傷模型，也可制成早、中、晚期的PD動物模型。如完全損傷模型可導(dǎo)致神經(jīng)元發(fā)生急性壞死，模擬PD的晚期特征，但動物的死亡率很高，故常采用單側(cè)小劑量損毀來模擬PD的早、中期特征，此方法使模型更接近于人類。此模型與人類PD在生化、病理等方面較相近，經(jīng)濟易行，行為學改變穩(wěn)定且便于觀察，是目前唯一可進行行為學量化檢測的模型，為研究PD的病機與治療（包括藥物、腦移植和基因治療等）提供了理想模型，因而得以廣泛應(yīng)用。但此模型仍屬急性損傷模型，無路易小體的形成并可對其他神經(jīng)元產(chǎn)生非特異性損傷。

1、模型制作

主要設(shè)備：腦立體定位儀、微量注射器、微型手持式顱鉆、氣體麻醉機、棉簽、手術(shù)器械（持針器、手術(shù)刀柄、眼科剪、眼科鑷、無菌縫合針線）

主要試劑：6-OHDA、生理鹽水、75%乙醇、阿撲嗎啡

材料：200g雄性SD大鼠

手術(shù)流程：

（1）將大鼠置于氣體麻醉機誘導(dǎo)箱內(nèi)麻醉平穩(wěn)后，俯臥平頭顱位固定于小動物腦立體定位儀上。

（2）75%酒精消毒手術(shù)部位，減去頭部頂毛，再次酒精消毒。

（3）沿顱頂正中切開動物皮膚，將顱骨表面的結(jié)締組織膜除凈，使前、后囟暴露清晰，少量出血時可用無菌棉簽壓迫止血。

（4）用規(guī)格為10μL的微量注射器抽取5μL的6-OHDA工作液，垂直固定于腦立體定位儀上，參照Paxinos＆Watson大鼠腦立體定位圖譜，選取大鼠單側(cè)兩點內(nèi)側(cè)前腦束（MFB）的注射坐標與體積為：①TB=-2.3mm，L=+1.2mm,AP=-4.4mm，DV=-8.2mm，2.5μL（7.5μg）；②TB=+3.4mm，L=+0.8mm,AP=-4.0mm，DV=-8.4mm，2.0μL（6μg）。將前囟作為標準參考點，讀取并標記注射靶點。

（5）于標記處使用鉆頭鉆開顱骨，微量注射器沿鉆孔垂直進針，向注射靶點內(nèi)推注6-OHDA工作液，推注速度0.5μL/min，進出針速度1mm/min，留針5min。

（6）消毒傷口，縫合皮膚，將動物置于安靜保溫處，清醒后自由進食飲水。