巨噬細胞特異性PDL1敲除小鼠+CRISPR/Cas9模型
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發(fā)布時間:2025-07-25 08:49:03 更新時間:2025-09-14 15:06:07
點擊:88
作者:中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心
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| 資源中文名稱 | 巨噬細胞特異性PD-L1敲除小鼠+CRISPR/Cas9 | 
|---|---|
| 資源英文名稱 | Macrophage-specific PD-L1 knockout mice +_ CRISPR/Cas9_ | 
| 疾病概述 | 本模型可用于結(jié)核等多種與巨噬細胞免疫相關(guān)的疾病的程序性死亡配體(PD-L1)功能機制研究。目前不涉及特定疾病 | 
| 實驗動物背景信息 | C57BL/6小鼠 | 
| 模型制作方法 | 包括實驗材料(實驗動物、試劑、儀器)、實驗環(huán)境、細胞培養(yǎng)/載體構(gòu)建/蛋白表達/病原培養(yǎng)鑒定方法、實驗操作規(guī)程、動物處理倫理等內(nèi)容。 (一)巨噬細胞上特異性小鼠制備的原理 條件性基因敲除小鼠的設(shè)計利用了位點特異性重組酶系統(tǒng)Cre/LoxP原理,需要在待敲除的一段目標(biāo)DNA序列的兩端各放置一個loxP序列,得到flox(flanked by loxP)小鼠。將flox小鼠與帶有組織或細胞特異性表達cre的小鼠交配繁殖,以獲得在特定細胞或者組織里把目的基因敲除掉的小鼠,即條件性基因敲除小鼠。 如下圖: 
 圖1 特異性敲除的原理 (二)條件敲除小鼠的繁殖和鑒定 1. 收到F0和F1小鼠后,首先確認(rèn)每只小鼠的腳趾編號是否吻合。 2. F0和F1小鼠由于數(shù)量較少,以后需要的動物多,與野生交配,盡量多繁殖,以備后續(xù)的研究。 3. 獲得小鼠后,提取基因組DNA,PCR擴增,進行基因型鑒定,并利用流式進行表型鑒定。 4. 繁殖方法有多種,以下為一種舉例: 首先將PD-L1Flox/-小鼠和C57BL/6小鼠進行雜交,得到PD-L1Flox/-小鼠,然后將PD-L1Flox/-小鼠進行自交,得到PD-L1Flox/Flox小鼠,將雌性PD-L1Flox/Flox小鼠和帶有巨噬細胞特異性表達 Cre 酶的Lyz2-iCre雄鼠進行雜交,得到 PD-L1Flox/- with Cre小鼠,最后將PD-L1Flox/Flox小鼠和PD-L1Flox/- with Cre小鼠雜交,得到1/4的PD-L1Flox/Flox with Cre小鼠,即為巨噬細胞特異性PD-L1敲除小鼠。 
 備注:PD-L1Flox/-小鼠由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗動物研究所基因工程平臺采用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建。巨噬細胞特異性PD-L1敲除小鼠繁育過程所需的6周齡 SPF 級C57BL/6小鼠購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司【SCXK(京) 2018-001】,6周齡SPF級雄性Lyz2-iCre小鼠2只,購自南京大學(xué)模式動物中心。小鼠均飼養(yǎng)于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗動物研究所屏障環(huán)境動物房【SYXK(京)2014-0029】,飼養(yǎng)間溫度( 23 ± 2) ℃,12 /12 h 明暗交替照明,動物自由飲水及采食。動物實驗中涉及動物的操作程序已經(jīng)得到中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗動物研究所實驗動物使用與管理委員會( IACUC) 的批準(zhǔn),批準(zhǔn)號為 ZLJ19003。 | 
| 模型表型數(shù)據(jù) | 1.細胞/基因/病原/蛋白表達/免疫組化 鑒定、病原學(xué)檢查信息 1.1基因鑒定: | 
 
                證書編號:241520345370
 
                證書編號:CNAS L22006
 
                證書編號:ISO9001-2024001
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

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