1、實驗儀器
束縛采用的實驗儀器為大、小鼠行為限制器。由聚酯材料構(gòu)成，透明可視，方便監(jiān)視大小鼠的行為狀態(tài)。頂端和底部有多個直徑1cm通氣孔，有助于大小鼠的呼吸暢通、排泄物的排出，避免對建模帶來干擾。行為限制器的長度可調(diào)，可將不同體重動物的束縛強度同一化。
圖1 行為限制器實物圖
2.實驗方法
將行為限制器平放、底部敞開，使動物面朝行為限制器敞口進入內(nèi)部。用配套的塞托封閉開口并固定塞托。使固定后，動物在行為限制器內(nèi)的空間長度小于其身長，并保證只有頭部可以自由活動而四肢活動受限（圖2）。
圖2 行為限制器的大鼠束縛
慢性束縛模型是采用行為制動的方式對動物產(chǎn)生單純性心理應(yīng)激，是比較常用的用于制備情緒、學(xué)習(xí)記憶障礙等動物模型的方法。引起抑郁、焦慮和學(xué)習(xí)記憶障礙的束縛強度不同文獻報導(dǎo)有一定的差異。大多報導(dǎo)強度在4 h-8 h/day、連續(xù)14-48 d 。
慢性束縛致抑郁模型的建立
一般慢性束縛致大鼠抑郁模型的建立采用每日限制大鼠活動 14 h( 18: 00 至次日 8: 00) ，限制活動期間各組禁食禁水。連續(xù)限制活動 28 d，第 29 天開始進行行為學(xué)測試。
一般慢性束縛致小鼠抑郁模型的建立采用每日限制大鼠活動 6 h( 10: 00 至16: 00) ，限制活動期間各組禁食禁水。連續(xù)限制活動 21 d，第 22天開始進行行為學(xué)測試。
3、行為學(xué)檢測
慢性束縛到規(guī)定時間后，依實驗需要，采用抑郁行為實驗方法進行檢測。
4. 注意事項
（1）行為實驗檢測應(yīng)在動物自由飲食飲水期間進行。
（2）實驗動物大鼠體重應(yīng)該控制在 280-300 g。小鼠體重應(yīng)該控制在25-32 g
（3）由于束縛器是樹脂材料的圓柱形，頂端有數(shù)個通氣的小孔，才束縛早期由于動物掙扎劇烈，會出現(xiàn)動物窒息的情況，所以一開始需要我們 24 h 觀察，及時排除動物窒息死亡的情形。
（4）行為測試完畢后的動物要返回行為限制器內(nèi)至實驗結(jié)束。
5. 模型分析指標
5.1 體重檢測
分別于第8、15、22、29、36、43、50 d 稱量大鼠的體重。
5.2 糖水偏愛實驗
于造模結(jié)束后第1 天開始實驗( 造模前進行糖水偏愛訓(xùn)練)。糖水偏愛實驗分為訓(xùn)練期( 適應(yīng)期) 及測試期。訓(xùn)練期內(nèi)，給予動物一瓶蔗糖糖水(2%) 和一瓶純水，動物自由飲水，讓小鼠適應(yīng)含糖飲水。動物禁食( 不禁水)8 h 后進行動物的糖水/ 純水消耗實驗測試(15h)，根據(jù)動物糖水、純水攝入量計算動物的糖水偏愛指數(shù)( 糖水偏愛指數(shù)= 糖水消耗/ 總液體消耗×100 %)。本實驗進行2 次糖水偏愛實驗。造模前進行糖水偏愛訓(xùn)練及基線測試，根據(jù)結(jié)果，將動物分組。應(yīng)激結(jié)束后，再進行一次糖水偏愛測試，以評價CUMS 模型快感缺失的癥狀。
5.3 新奇事物實驗
于自主活動實驗次日將大鼠放入自主活動測試箱中測試。測試前在測試箱中央放入一個藍色的圓柱體新奇事物。實驗時將大鼠面向測試箱壁放入，并記錄10 min 內(nèi)首次探索新奇事物的時間( 即潛伏期，10 min 內(nèi)無探索行為，則潛伏期時間記為10 min) 、探索次數(shù)以及探索時間。
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