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手足口病柯薩奇病毒A10型腹腔感染小鼠模型

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手足口病柯薩奇病毒A10型腹腔感染小鼠模型

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發布時間：2025-07-25 08:49:03 更新時間：2025-09-14 15:06:07

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作者：中科光析科學技術研究所檢測中心

手足口病柯薩奇病毒A10型腹腔感染小鼠模型

手足口病柯薩奇病毒A10型腹腔感染小鼠模型

手足口病柯薩奇病毒A10型腹腔感染小鼠模型

資源中文名稱	手足口病柯薩奇病毒A10型腹腔感染小鼠模型
資源英文名稱	Coxsackievirus A10 infected mice model
疾病概述	手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，多發生于5歲以下兒童，表現口痛、厭食、低熱、手、足、口腔等部位出現小皰疹或小潰瘍，多數患兒一周左右自愈，少數患兒可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發癥。個別重癥患兒病情發展快，導致死亡。引發手足口病的腸道病毒有20多種（型），自2008年在新加坡的暴發流行，柯薩奇病毒A10型（Coxsackievirus A10，CA10）成為手足口病主要致病血清型之一，由其感染引起的手足口病爆發事件在法國、芬蘭、印度等國家和地區不斷被報道。2013年以前，中國多地區暴發流行的手足口病病原以EV71和CA16為主，CA6和CA10次之。2013年以后，CA10引起的手足口病比例逐漸上升，成為國內手足口病感染的優勢病原體之一。CA10共分為A～G的7個基因型。目前國內外大多通過與周邊地區或其他國家的流行株進行核苷酸和氨基酸的同源性對比，來分析CA10的流行情況。在我國，CA10近年來在多地區流行的病毒株保持著較高的同源性，與其他國家的分離株之間的同源性距離較遠，具有地域分布特點以及一定的時間分布特點。CA10傳染性強、隱性感染比例大、傳播途徑復雜、傳播速度快，在短時間內可造成較大范圍的流行，疫情控制難度大。 CA10病毒主要通過糞口途徑傳播，主要經胃腸道進入機體內。病毒在入侵的局部上皮細胞中完成增殖，然后病毒侵入局部淋巴組織中繼續增殖并釋放入血導致第一次病毒血癥。病毒隨血液傳播接觸到正常靶細胞。病毒表面的VP1蛋白與靶細胞表面特異性受體結合，完成吸附過程，其基因組RNA進入胞質。之后，病毒以其正鏈RNA作為模板，合成互補的負鏈RNA，又以負鏈RNA為模板合成病毒正鏈RNA，從而得到大量病毒RNA，進入子代病毒顆粒組裝階段。通過轉錄、翻譯，出二代病毒，再次釋放入血形成第二次病毒血癥并引起臨床癥狀。目前有大量研究表明，手足口病患兒的細胞免疫出現紊亂，并且這種免疫紊亂在重癥與死亡病例中表現得更加嚴重。肺水腫被認為是感染的患兒中是最為嚴重的并發癥之一，腦干的損傷則被認為是導致肺水腫的重要因素。很多研究表明參與細胞免疫的諸多炎性因子，例如IL-1、IL-6、IL-10、IL-13、IFN-γ、TNF-α的增加、T細胞亞群CD3+CD4+，以及自然殺傷細胞（NK）等，與肺水腫的發生具有相關性。 CA10易感染5歲以下年齡的幼兒，潛伏期多為2-10天。CA10感染兒童多引起輕型手足口病，患兒往往無明顯的早期癥狀，大多數病人預后良好。臨床上，往往表現為多發的斑丘疹和（或）皰疹，最多見于手足口、臂及膝關節。典型皰疹通常突出皮膚表面，呈現黃豆粒大小，圓形或橢圓形，其內液體混濁，常無疼痛和瘙癢感，約1周時間皰疹可自行消退，通常不留疤痕。病人或伴有發熱、流涕、咳嗽、食欲不振、惡心、嘔吐或腹瀉等癥狀，一般能自愈，無后遺癥。但少數兒童感染CA10后出現嚴重并發癥，如腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹和神經呼吸綜合征等。隨著CA10流行程度的增加、重癥病例的出現，開發針對性的抗病毒藥物和疫苗成為當務之急，而建立穩定的CA10感染動物模型不僅是開發藥物和疫苗的關鍵點之一，也為研究病毒的感染機制和機體免疫反應提供研究基礎。
實驗動物背景信息	ICR小鼠毛色白化。適應性強，體格健壯，繁殖力強，生長速度快，實驗重復性較好，雌鼠自發性畸胎瘤和管狀腺瘤發病率為0%-1%，用氨基甲酸乙酯誘發時，11-16天胚胎期畸胎瘤和管狀腺瘤發病率為5.9%，離乳個體管狀腺瘤和囊瘤發生率為30%,孕鼠為3%。是國際通用的封閉群小鼠。外周血項和骨髓細胞，具有較好的穩定性，是良好的血液學實驗用動物。是進行手足口病原研究的理想動物。
模型制作方法	1.病毒準備：CA10病毒(GenBank: MF688814.1)，由醫院咽拭子分離得到，在人橫紋肌瘤細胞（RD）中培養、擴增，并采用反復凍融法釋放病毒，離心富集病毒。具體操作如下： RD細胞經常規傳代培養接種到T75細胞培養瓶，感染前棄去原培養基，細胞用含2%雙抗的PBS 洗2遍，吸出PBS后加入無血清DMEM培養基。接種適量的CA10病毒后，置37℃ 5% CO₂培養箱孵育1-2h；加入完全培養基繼續培養。接種病毒后2-3d病變CPE達到+++～++++，將T75細胞瓶置封口袋中，-80℃超低溫冰箱凍化3次。然后將培養液轉移至50mL離心管中，4℃，2000rpm離心20min，沉淀細胞碎片。吸取病毒上清，分裝后凍存，并測定病毒滴度TICD₅₀。

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