Tunel凋亡實驗

Tunel原理：
凋亡的一個特征是內源性核酸內切酶被激活，細胞自身的染色質或 DNA 被切割，出現單鏈或雙鏈缺口，并產生與 DNA 斷點數目相同的 3’-OH 末端，地高辛標記的 dUTP （ DIG-dUTP）標記至 3’-OH 末端，與生物標記的抗地高辛抗體（ Anti-DIG-Biotin）反應后，再結合
鏈酶親和素-過氧化物酶（ SABC），然后加入顯色底物 DAB 予以顯示。

實驗流程：

1.樣品處理；

 （1）細胞涂片和冰凍切片： 

 （2）組織： 

2.滅活；

3.消化；

4.  標本片加標記緩沖液(Labeling Buffer) 、TdT和、DIG-d-UTP ；

5.TBS 洗滌；

6.加封閉液 ；

7.加入生物素化抗地高辛抗體；

8. 加入 SABC；

9. DAB 顯色；

10. 蘇木素輕度復染、脫水、封片、顯微鏡觀察。
注意事項：

1、未打開的試劑盒貯存在－20℃（－15～25℃），一旦解凍， 以后就保存在4℃（2～8℃）下，避免反復凍融。

2、初次檢測細胞凋亡，最好設置陽性和陰性對照片。

3、血細胞含量高的組織，盡可能延長過氧化氫的滅活時間。

4、使用新鮮的H2O2溶液，孵育后立即將標本放入PBS清洗  （H2O2可導致DNA損傷）

5、假陽性高是TUNEL檢測的一個主要缺點。觀察TUNEL陽性片是應對照HE切片。結合細胞HE染色來判斷陽性的細胞 究竟是假陽性還是真正發生了凋亡。

檢測機構資質證書

CMA認證

檢驗檢測機構資質認定證書

證書編號：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS認可

實驗室認可證書

證書編號：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO認證

質量管理體系認證證書

證書編號：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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