免疫共沉淀(Co-IP蛋白與蛋白)
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發布時間:2025-07-25 08:49:03 更新時間:2025-09-14 15:00:08
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作者:中科光析科學技術研究所檢測中心
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免疫共沉淀(Co-IP蛋白與蛋白)
(1)相互作用的蛋白質都是經翻譯后修飾的,處于天然狀態;(2)蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的,可以避免人為的影響;(3)可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物。免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用
的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。其原理是:當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內結合的蛋白質Y也能沉淀下來。目前多用精制的prorein A預先結合固化在argarose的beads上,使之與含有抗原的溶液及抗體反應后,beads上的prorein A就能吸附抗原達到精制的目的。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合,也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。
Co-IP的原理與免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)大致相似,都由特異抗體與待檢樣品中相應的特異抗原結合形成抗原一抗體免疫復合物,然后復合物吸附于固化了蛋白A或G的支持物上(蛋白A或G具有吸附抗體的能力),相應的抗原分子也同時被吸附。免疫復合物被吸附到支持物上的過程即為沉淀(Precipitation)。沒有被沉淀的蛋白質隨著緩沖液的流洗而被除去。但在免疫共沉淀中,與靶抗原一起被沉淀的還有靶抗原的相互作用蛋白質,即隨著抗體被吸附于固化了蛋白A或G的支持物上,相應的抗原及其相互作用蛋白質也同時被沉淀。最后,采用相互作用蛋白質的特異抗體經Western Blot檢測,以證實二者存在相互作用。

證書編號:241520345370
證書編號:CNAS L22006
證書編號:ISO9001-2024001

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