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抗微生物活性檢測

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發布時間：2025-08-06 12:36:41 更新時間：2025-09-15 17:37:15

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作者：中科光析科學技術研究所檢測中心

抗微生物活性檢測

抗微生物活性檢測是評估物質（如抗生素、消毒劑、防腐劑、抗菌材料等）抑制或殺滅微生物（包括細菌、真菌、病毒等）能力的關鍵技術手段。它在多個領域具有至關重要的應用價值，例如：新藥研發中篩選和評價候選藥物的有效性；醫療器械消毒效果的驗證；食品、化妝品和日化產品中防腐體系的安全性及效能評估；環境消毒劑的效力測試；以及新型抗菌材料的性能表征。通過科學、標準的抗微生物活性檢測，可以為產品的質量控制、安全使用、法規注冊及臨床效果提供可靠的數據支持。了解并掌握相關的檢測項目、使用的精密儀器、嚴謹的實驗方法以及遵循的國內外標準，是確保檢測結果準確、可靠、可比性的核心要素。

核心檢測項目

抗微生物活性檢測涵蓋多個具體項目，根據測試物質、目標微生物和應用目的的不同而有所側重，主要包括：

最小抑菌濃度：指在特定實驗條件下，能夠完全抑制微生物可見生長的最低藥物濃度。是評價抗菌藥物體外活性的金標準之一。
最小殺菌濃度：指在特定實驗條件下，能夠殺死特定微生物的最低藥物濃度，反映物質的殺滅能力。
抑菌圈直徑：主要用于擴散法（如紙片法、牛津杯法），通過測量藥物擴散形成的清晰無菌區域的大小來評估抑菌效果。
時間-殺菌曲線：動態監測藥物在不同時間點對微生物的殺滅效果，評價殺菌速率和持久性。
殺菌率/抑菌率：計算在特定條件下，藥物處理后微生物數量減少或未生長的百分比。
抗菌譜：評價測試物質對不同種類微生物（如革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌、特定耐藥菌株）的作用范圍。

關鍵檢測儀器

進行精準的抗微生物活性檢測，依賴于一系列先進的實驗室儀器：

微生物培養設備：恒溫培養箱、CO2培養箱、厭氧培養系統，用于提供微生物生長所需的條件。
無菌操作設備：生物安全柜/超凈工作臺，確保實驗過程的無菌環境，保護操作人員和樣品。
液體處理設備：精密移液器、多通道移液器、自動化液體工作站，用于高精度加樣和稀釋。
濃度測定設備：比濁儀/濁度儀，用于快速測定菌懸液濃度（如麥氏比濁法）；酶標儀（帶震蕩和溫控功能），廣泛應用于微量稀釋法MIC測定及菌液OD值測定。
結果判讀設備：抑菌圈測量儀（游標卡尺或自動化影像分析系統），用于精確測量抑菌圈直徑；全自動微生物鑒定及藥敏分析系統，可高通量進行MIC等測試。
樣品制備設備：均質器、漩渦混合器，用于樣品前處理和菌懸液混勻。
高壓滅菌設備：高壓蒸汽滅菌鍋，用于培養基、實驗耗材及廢棄物的滅菌。

主要檢測方法

根據檢測原理和應用場景，抗微生物活性檢測主要采用以下幾類方法：

瓊脂擴散法：
- 原理：藥物在瓊脂培養基中擴散，形成濃度梯度，抑制周圍微生物生長形成抑菌圈。
- 常用方法：紙片擴散法（Kirby-Bauer法）、牛津杯法、打孔法。
- 適用：快速定性或半定量篩選；抗菌譜測定；常用于細菌和酵母菌的藥敏試驗。
液體稀釋法：
- 原理：在液體培養基中設置一系列倍比稀釋的藥物濃度，接種定量微生物，培養后觀察有無生長。
- 常用方法：試管稀釋法（肉湯稀釋法）、微量肉湯稀釋法（在96孔微孔板中進行）。
- 適用：精確測定MIC、MBC；是評價抗菌活性的基準方法。
瓊脂稀釋法：
- 原理：將不同濃度藥物混入瓊脂培養基中制成含藥平板，點種定量微生物。
- 適用：同時測試多個菌株對單一藥物的MIC；特別適用于測試生長要求苛刻或需要特殊培養條件的微生物。
殺菌動力學試驗：
- 原理：在特定時間點取樣，通過平板計數法測定殘留活菌數，繪制時間-殺菌曲線。
- 適用：評價消毒劑、防腐劑的殺菌速率和效果；研究藥物的殺菌動力學特征。
懸浮定量試驗：
- 原理：將微生物懸液直接與一定濃度的藥物作用一段時間后，中和殘留藥物，通過培養或計數法測定存活微生物數量，計算殺菌率/抑菌率。
- 常用標準方法：如歐洲EN標準、美國AOAC方法、中國消毒技術規范中的載體浸泡法或懸液法。
- 適用：消毒劑、防腐劑的效力評價。

重要檢測標準

為確保檢測結果的科學性、準確性和可比性，必須嚴格遵循國內外公認的標準操作規程：

藥敏試驗標準：
- CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute)：發布M系列文件（如 M07, M26, M27, M44, M100），是國際公認的細菌和真菌藥敏試驗金標準，詳細規定了方法、培養基、菌種質控、結果判讀等。
- EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing)：歐洲標準，與CLSI類似，但部分折點存在差異。
消毒劑/防腐劑效力測試標準：
- 歐洲標準 (EN)：如EN 1040（基本殺菌活性）、EN 1275（基本殺真菌活性）、EN 13727（醫療器械用化學消毒劑殺菌活性）、EN 13624（醫療器械用化學消毒劑殺真菌活性）、EN 14561/EN 14562（載體法殺分枝桿菌活性）、EN 14476（殺病毒活性）等。
- 美國標準：如AOAC Official Methods (如AOAC 955.14, 955.15, 955.17等)，EPA (Environmental Protection Agency) 注冊要求的方法。
- 中國國家標準 (GB)：如GB/T 38502 《消毒劑實驗室殺菌效果檢驗方法》、GB 15979 《一次性使用衛生用品衛生標準》附錄、消毒技術規范（衛生部）等。
- 國際標準 (ISO)：如ISO 20743 (抗菌整理紡織品的抗菌性測定)、ISO 22196 (塑料及其他非多孔表面抗菌活性測定) 等針對特定產品的標準。
其他相關標準：針對特定產品或領域的標準，如化妝品防腐挑戰測試標準（如USP <51>, EP/BP 5.1.3, ISO 11930, CTFA M-3）。