抗原性蛋白質含量免疫學測定方法檢測

抗原性蛋白質含量免疫學測定方法檢測

抗原性蛋白質是指能夠誘導機體產生特異性免疫應答（產生抗體或致敏淋巴細胞）的蛋白質分子。準確測定生物樣本（如疫苗、生物治療藥物、診斷試劑、食品過敏原、環境污染物等）中抗原性蛋白質的含量，對于評估其免疫原性、安全性、有效性以及進行質量控制至關重要。免疫學測定方法是基于抗原與抗體之間高度特異性的結合反應來定量或定性檢測目標抗原蛋白的核心技術，因其具有特異性強、靈敏度高、操作相對便捷等顯著優勢，已成為生物醫藥、食品安全、環境監測和基礎研究等領域不可或缺的分析手段。這些方法能夠有效識別具有完整表位結構、保留免疫反應活性的目標蛋白，而非僅僅檢測總蛋白含量。

檢測項目

免疫學測定方法的核心檢測項目是樣本中特定抗原性蛋白質（Target Antigenic Protein）的含量或濃度。這通常包括：

• 絕對定量： 測定樣本中目標抗原蛋白的精確濃度（如 ng/mL, μg/mL, IU/mL）。
• 相對定量： 比較不同樣本或處理條件下目標抗原蛋白含量的相對變化。
• 活性檢測： 評估抗原蛋白結合其特異性抗體的能力，間接反映其功能性表位的完整性（常通過競爭法或抑制法實現）。
• 純度分析： 在復雜混合物（如重組蛋白產物）中檢測目標抗原蛋白相對于雜蛋白的比例（常結合電泳及免疫印跡）。

檢測儀器

免疫學測定方法依賴于一系列精密的儀器設備進行信號讀取、數據處理和操作自動化：

• 酶標儀 (Microplate Reader / ELISA Reader)： 這是最常用的儀器，主要用于讀取酶聯免疫吸附試驗（ELISA）中微孔板內發生的顏色變化（吸光度值，OD值）。可配備不同波長的濾光片或光柵。
• 化學發光檢測儀 (Chemiluminescence Detector)： 用于檢測化學發光免疫分析（CLIA）中產生的光信號，具有極高的靈敏度。
• 熒光檢測儀 (Fluorescence Detector / Fluorometer)： 用于檢測熒光免疫分析（FIA）或時間分辨熒光免疫分析（TRFIA）中發出的熒光信號。
• 電化學發光免疫分析儀 (Electrochemiluminescence Immunoassay Analyzer, 如 Roche Cobas e系列)： 用于自動化、高通量的電化學發光免疫分析。
• 免疫印跡系統 (Western Blotting System)： 包括電泳儀、轉膜儀、成像系統（通常為化學發光成像系統或熒光成像系統）和配套的分析軟件，用于檢測經凝膠電泳分離后轉移到膜上的抗原蛋白。
• 流式細胞儀 (Flow Cytometer)： 用于基于微球的多重免疫分析（如 Luminex 技術）或細胞表面/胞內抗原的檢測。
• 自動化液體處理工作站 (Automated Liquid Handler)： 用于高通量實驗中的樣本加樣、稀釋、試劑添加等步驟，提高效率和精度。
• 洗板機 (Microplate Washer)： 用于ELISA等步驟中的洗板操作。
• 恒溫孵育器 (Incubator)： 為抗原抗體反應提供恒定的溫度環境。

檢測方法

抗原性蛋白質含量的免疫學測定方法多種多樣，主要包括：

• 酶聯免疫吸附試驗 (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)：
  • 直接法ELISA： 抗原直接吸附固相，酶標一抗結合檢測。
  • 間接法ELISA： 抗原吸附固相，一抗結合，酶標二抗（抗一抗）結合檢測。最常用，信號放大效果佳。
  • 夾心法ELISA (Sandwich ELISA)： 捕獲抗體包被固相，捕獲抗原，酶標檢測抗體結合。特異性最高，適用于復雜樣本，需配對抗體。
  • 競爭法ELISA (Competitive ELISA)： 適用于小分子或半抗原，或當無法獲得配對抗體時。待測抗原與標記抗原競爭結合有限量的抗體。
• 免疫印跡法 (Western Blotting, WB)： 樣本經SDS-PAGE電泳分離，轉印至膜上，用特異性抗體探測目標條帶。主要用于定性或半定量檢測，以及評估抗原分子量和特異性。
• 放射免疫分析法 (Radioimmunoassay, RIA)： 使用放射性同位素標記抗原或抗體進行檢測，靈敏度高，但因放射性危害應用逐漸減少。
• 化學發光免疫分析法 (Chemiluminescence Immunoassay, CLIA)： 用化學發光物質（如魯米諾、吖啶酯）標記抗原/抗體，通過發光強度定量。靈敏度高，動態范圍寬，自動化程度高。
• 熒光免疫分析法 (Fluorescence Immunoassay, FIA)： 用熒光物質標記抗原/抗體進行檢測。
• 時間分辨熒光免疫分析法 (Time-Resolved Fluorescence Immunoassay, TRFIA)： 使用鑭系元素螯合物（如銪Eu3?）作為熒光標記物，利用其長熒光壽命的特點，延遲測量時間以消除背景熒光干擾，靈敏度極高。
• 電化學發光免疫分析法 (Electrochemiluminescence Immunoassay, ECLIA)： 在電極表面通過電化學反應觸發標記物（如三聯吡啶釕）發光。結合了電化學和化學發光的優點，靈敏度高、穩定性好，易于自動化。
• 免疫比濁法 / 免疫散射比濁法 (Immunoturbidimetry / Nephelometry)： 用于可溶性抗原，抗原抗體復合物形成導致溶液濁度變化，通過測定吸光度（比濁）或散射光強度（散射比濁）進行定量。常用于血清蛋白如補體、免疫球蛋白等的快速檢測。
• 基于微球的多重免疫分析 (Multiplex Bead-Based Immunoassays, 如 Luminex xMAP技術)： 使用不同熒光編碼的微球同時捕獲多種抗原，結合熒光報告分子，利用流式細胞術原理進行檢測，實現單一樣本中多種目標蛋白的高通量檢測。

檢測標準

為確保抗原性蛋白質含量免疫學測定結果的準確性、精密度、可靠性和可比性，必須遵循相關的檢測標準和方法學驗證原則：

• 方法學驗證參數： 任何定量免疫學方法在應用前或變更后都需要進行全面的驗證，關鍵參數包括：
  • 特異性 (Specificity)： 方法區分目標抗原與樣品中其他成分（尤其是結構類似物）的能力。
  • 靈敏度 (Sensitivity)： 通常指最低檢測限 (Limit of Detection, LOD) 和最低定量限 (Limit of Quantification, LOQ)。LOD是能可靠檢出但尚不能準確定量的最低濃度；LOQ是在可接受的精密度和準確度下能定量測定的最低濃度。
  • 準確度 (Accuracy)： 測定結果與真實值（或參考值）接近的程度，常用回收率實驗評估。
  • 精密度 (Precision)： 包括批內精密度（同一次實驗內重復測定）和批間精密度（不同時間、不同操作者、不同批次試劑等重復測定），以相對標準偏差 (%RSD) 表示。
  • 線性范圍 (Linearity)： 在給定范圍內，檢測信號與目標物濃度呈線性關系的區間。
  • 穩健性/耐用性 (Robustness/Ruggedness)： 在方法參數（如孵育時間、溫度、試劑批次）發生微小變化時，測定結果保持不受影響的能力。
• 國際/國家/行業標準：
  • ISO 國際標準： 如 ISO 5725 (測量方法與結果的準確度)，ISO/IEC 17025 (檢測和校準實驗室能力的通用要求) 中關于方法驗證的要求。

  • 檢測機構資質證書

    

    CMA認證

    檢驗檢測機構資質認定證書

    證書編號：241520345370

    有效期至：2030年4月15日

    

    CNAS認可

    實驗室認可證書

    證書編號：CNAS L22006

    有效期至：2030年12月1日

    

    ISO認證

    質量管理體系認證證書

    證書編號：ISO9001-2024001

    有效期至：2027年12月31日