彗星實驗去哪里做?中析研究所檢測中心可做各類彗星實驗，出具第三方檢測報告。
一、彗星實驗介紹
“彗星”實驗又稱單細胞凝膠電泳實驗，是一種通過檢測DNA鏈損傷來判別遺傳毒性的技術。它能有效地檢測并定量分析細胞中DNA單、雙鏈缺口損傷的程度。當各種內源性和外源性DNA損傷因子誘發細胞DNA鏈斷裂時，其超螺旋結構受到破壞，在細胞裂解液作用下，細胞膜、核膜等膜結構受到破壞，細胞內的蛋白質、RNA以及其他成分均擴散到電解液中，而核DNA由于分子量太大不能進入凝膠而留在原位。在中性條件下，DNA片段可進入凝膠發生遷移，而在堿性電解質的作用下，DNA發生解螺旋，損傷的DNA斷鏈及片段被釋放出來。在電泳過程中，這些DNA斷鏈及片段帶會離開核DNA 向正極遷移形成“彗星”狀圖像，而未受損傷的DNA部分保持球形。DNA受損越嚴重，產生的斷鏈和斷片越多，長度也越大，在相同的電泳條件下遷移的DNA量就愈多，遷移的距離就愈長。通過測定DNA遷移部分的光密度或遷移長度就可以測定單個細胞DNA損傷程度，從而確定受試物的作用劑量與DNA損傷效應的關系。該法檢測低濃度遺傳毒物具有高靈敏性，研究的細胞不需處于有絲分裂期。同時，這種技術只需要少量細胞。
二、客戶提供標本或者相關資料
1. 研究用細胞或組織;
2. 檢測的指標;
3. 請客戶提供DNA受損詳細相關信息或相關文獻。
三、單細胞凝膠電泳實驗流程
1.細胞接種：單細胞凝膠電泳實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行單細胞凝膠電泳實驗當天細胞密度應達到60%～80%覆蓋;
2. DNA損傷處理;
3. 收集細胞，制備單細胞懸液;
4. 制備膠板;
5. 細胞裂解與電泳;
6. 中和與染色;
6. 熒光顯微鏡拍照，記錄實驗結果。
四、最終結果
1. 陰性對照結果;
2. 具體試驗流程(包括：實驗步驟;主要儀器及試劑說明(含儀器廠家、型號;試劑廠家、批號));
3. 原始實驗圖片及數據。
1.制片
第一層膠: 將預熱45℃的80ul, 0.6% 的正常熔點瓊脂糖(NMA ) 滴在磨 砂載玻片的磨砂面上, 迅速用一干凈玻片邊緣將膠鋪平, 或加蓋蓋玻片壓平膠面, 將玻片臵保濕盒內,4℃,10 min 使膠凝固。第二層膠: 將10ul待測細胞懸液盒75ul, 0.6% 的低熔點瓊脂糖(LMA ) 在
37℃混勻,滴在第一層膠板上(加蓋玻片者需先輕輕揭去蓋玻片) , 迅速加干凈的蓋玻片使膠鋪平, 將玻片臵保濕盒內, 4℃,10 min使膠凝固。第三層膠: 在凝固的LMA層上滴加37℃,0.6%LMA,蓋上蓋玻片,使其凝固。鋪第一層膠的目的是使第二層膠平整、附著緊密, 鋪第
三層膠的目的是對第二層膠中的細胞起保護作用。
2.裂解
移去蓋玻片, 將載玻片水平浸入新配臵的預冷4℃裂解液
( 2.5 mol/L NaCl, 100mmol/L Na2EDTA,10 mmol/L Tris, 1%肌氨酸鈉, pH = 10, 用前加入1% 體積的Triton X2100, 10%二甲亞砜) 中至少1小時。此步驟的目的是溶解細胞膜及核膜, 除去蛋白質、RNA 等, 僅存留核骨架。
3.解旋
從裂解液中取出載玻片, 用蒸餾水浸泡或PBS沖洗, 洗去膠表面的鹽溶液然后將載玻片臵于水平電泳槽中,倒入新配制的堿性電泳緩沖液(1 mmol/L Na2EDTA,300 mmol/L NaOH, pH = 13), 約沒過膠面0.25cm 左右, 堿解旋20～40 min, 以便使DNA 在堿性條件下解旋成單鏈DNA,使DNA 斷片在電泳場中易于遷移。
4.電泳
電壓25V,電流300mA,低溫避光,電泳20～40min。
5.中和
將載玻片取出,用0.4 mmol/L Tris 緩沖液(pH = 7.5) 中和2～3 次, 每 次5～15 min, 以除去堿和去污劑,以免影響染色效果。
6.染色觀察
根據顯微鏡的濾鏡種類選擇染色劑。常用吖啶橙(2mg/L)、溴化乙啶 (20mg/L)、碘化丙啶(2.5～5.0 mg/L )、4,6-聯脒-2-苯基吲哚(5 mg/L)或苯并嗯唑啉2-2喹啉等, 用量50～100ul, 滴臵膠板上, 蓋上蓋玻片, 24小時內檢測, 時間過長將導致熒光減弱。上述過程均應在黃光或紅光下操作, 以避免DNA 的額外損傷。
鋪膠方法：
鋪第一層膠時，玻片先放到水浴箱蓋上(我用的是90度以上的)或其他地方預熱，這樣鋪膠時膠不容易凝固，跟做血涂片時的推片類似，先讓膠在蓋玻片一側邊緣展開，然后放下蓋玻片即可。冰盒中放置幾分鐘后，推掉蓋玻片，將玻片放在水浴箱蓋上烘干，冷至室溫后再鋪第二層，感覺不易脫膠，并且很容易鋪開，方法同第一層。
CMA認證
檢驗檢測機構資質認定證書
證書編號：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認可
實驗室認可證書
證書編號：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認證
質量管理體系認證證書
證書編號：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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