HPLC檢測

一、HPLC基本原理與組成

1. 工作原理

高效液相色譜（HPLC）基于 樣品組分在固定相與流動相間的分配差異 實現(xiàn)分離，通過檢測器（UV、DAD、熒光等）定量分析目標物。2. 儀器組成

二、方法開發(fā)關(guān)鍵步驟

1. 目標物與樣品特性分析

• 溶解性：選擇適合的流動相（如甲醇/乙腈-水）。
• 極性：反相色譜（C18）適合中等極性至非極性化合物。
• 離子性：離子對試劑（如TFA）或離子交換柱用于強極性/帶電物質(zhì)。

2. 色譜條件優(yōu)化

3. 方法驗證（ICH Q2標準）

三、操作流程與注意事項

1. 樣品前處理

• 液體樣品：過濾（0.22μm濾膜）去除顆粒物。
• 固體樣品：超聲提取（甲醇/乙腈）、離心、SPE凈化（如C18柱除脂質(zhì)）。

2. 上機步驟

1. 平衡色譜柱：流動相沖洗30min至基線平穩(wěn)。
2. 進樣分析：進樣量5-20μL（避免超載導致峰形畸變）。
3. 數(shù)據(jù)采集：記錄保留時間、峰面積及色譜圖。

3. 關(guān)鍵注意事項

• 色譜柱保護：使用保護柱（Guard Column），定期沖洗（高水相后需過渡到有機相保存）。
• 基線漂移處理：檢查流動相純度（HPLC級試劑）、脫氣（超聲或在線脫氣機）。
• 峰分裂/拖尾：優(yōu)化流動相pH（如±0.1調(diào)節(jié)），或更換色譜柱品牌（填料差異）。

四、典型應用案例

1. 藥物分析

• 阿莫西林含量測定：
  • 色譜條件：C18柱（4.6×250mm, 5μm），流動相乙腈-0.1%磷酸（15:85），流速1.0mL/min，檢測波長254nm。
  • 結(jié)果：保留時間8.2min，線性范圍0.1-100μg/mL，RSD=0.8%。

2. 食品安全

• 食品中防腐劑（苯甲酸）檢測：
  • 前處理：樣品酸化后乙醚萃取，氮吹復溶。
  • 色譜條件：HILIC柱，流動相乙腈-10mM乙酸銨（90:10），檢測波長230nm。

3. 環(huán)境監(jiān)測

• 水中多環(huán)芳烴（PAHs）分析：
  • SPE凈化：C18柱富集，二氯甲烷洗脫。
  • 熒光檢測：Ex 260nm/Em 420nm（針對苯并[a]芘）。

五、常見問題與解決

六、進階技術(shù)擴展

• UHPLC（超高效液相色譜）：使用亞2μm填料，提升分離速度與分辨率。
• HPLC-MS聯(lián)用：質(zhì)譜檢測器提供高靈敏度與結(jié)構(gòu)鑒定能力（如Q-TOF用于代謝組學）。

通過系統(tǒng)化的HPLC方法開發(fā)與優(yōu)化，可實現(xiàn)對復雜樣品的高效、精準分析。建議根據(jù)檢測需求選擇合適配置，并定期進行儀器維護與方法驗證，確保數(shù)據(jù)可靠性。如需特定化合物檢測方案，可進一步提供目標物信息以定制方法。

檢測機構(gòu)資質(zhì)證書

CMA認證

檢驗檢測機構(gòu)資質(zhì)認定證書

證書編號：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS認可

實驗室認可證書

證書編號：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO認證

質(zhì)量管理體系認證證書

證書編號：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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