高表達Fbxw11選擇性剪接體的MLLAF9誘導的小鼠髓細胞白血病模型

SPF級6-8周齡鼠，C57BL/6J小鼠（CD45.2）， B6.SJL-PtprcaPepcb/BoyJ小鼠（B6.SJL，CD45.1）。

1. 病毒準備

細胞：293T

表達載體：MSCV- MLL-AF9 -IRES-GFP，MSCV- Fbxw11 -IRES-BFP。

2. 實驗動物

可使用SPF級別的6-8周齡鼠， C57BL/6J小鼠（CD45.2）， B6.SJL-PtprcaPepcb/BoyJ小鼠（B6.SJL，CD45.1）。

3. 細胞準備：

取B6.SJL小鼠的骨髓細胞，利用C-kit⁺磁珠，富集C-kit⁺造血干祖細胞

4. 病毒感染

富集的小鼠C-kit⁺造血干祖細胞，體外感染表達MSCV- MLL-AF9 -IRES-GFP的逆轉錄病毒，感染后培養48h。

5. 細胞回輸

感染后的C-kit⁺造血干祖細胞利用流式細胞儀分選出GFP⁺的細胞，通過尾靜脈注射到致死劑量照射的C57BL/6J小鼠體內，每周檢測GFP⁺細胞的比例。

6. 病毒二次感染及回輸

當檢測到小鼠外周血GFP⁺細胞的比例超過50%，處死小鼠，取小鼠骨髓細胞，分選出GFP⁺細胞，體外感染表達MSCV- Fbxw11 -IRES-BFP的逆轉錄病毒，感染后培養48h, 通過尾靜脈注射到C57BL/6J小鼠體內，每周檢測GFP⁺ BFP⁺細胞的比例。

7. 模型分析指標

1. 癥狀觀察

細胞回輸后小鼠癥狀表現為：豎毛、弓背。

2. 流式檢測

在細胞回輸后的一周后，每周檢測外周血GFP⁺ BFP⁺細胞的比例，有出現GFP⁺ BFP⁺細胞，即為模型成功。