水生動物及其產品病毒性出血性敗血癥病毒(VHSV)檢測
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發布時間:2025-10-22 21:54:40 更新時間:2025-10-21 21:54:40
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作者:中科光析科學技術研究所檢測中心
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病毒性出血性敗血癥病毒(Viral Hemorrhagic Septicemia Virus,VHSV)是嚴重危害水生動物健康的病原體,主要感染鮭科魚類及其他多種淡水與海水魚類。該病毒引發的病毒性出血性敗血癥(VHS)具有高傳染性和致死性,可導致養殖業重大經濟損失,并對野生魚類種群構成威脅。因此,開展VHSV的快速、準確檢測對于水產養殖疾病防控、進出口檢疫以及生態保護至關重要。檢測工作通常涉及對活體水生動物、其組織樣本(如腎臟、脾臟)或加工產品進行病毒篩查,以確保生物安全并防止疫情擴散。通過系統性檢測,可及時識別感染源,采取隔離或撲殺措施,有效遏制病毒傳播。
VHSV檢測項目主要包括病毒病原學檢測、分子生物學檢測以及血清學檢測三大類。病原學檢測側重于通過細胞培養分離病毒,觀察特征性細胞病變效應(CPE),適用于病毒活性的確認。分子生物學檢測則聚焦于病毒核酸的識別,常用方法包括逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和實時熒光定量PCR(qRT-PCR),能夠高靈敏度地檢測病毒RNA,尤其適合早期診斷和大規模篩查。血清學檢測則通過檢測魚類血清中的特異性抗體,如采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)或病毒中和試驗,評估群體免疫狀況或追溯既往感染歷史。此外,針對水生動物產品(如冷凍魚卵、魚糜等),還需進行病毒存活性檢測,確保加工過程未殘留活性病毒。
VHSV檢測依賴于多種精密儀器以保證結果的準確性與可靠性。細胞培養環節需使用生物安全柜、二氧化碳培養箱及倒置顯微鏡,用于病毒分離與病變觀察。分子生物學檢測中,核酸提取儀、PCR擴增儀、實時熒光定量PCR儀以及凝膠成像系統是核心設備,可實現病毒RNA的高通量提取與定量分析。血清學檢測則常用酶標儀、洗板機等自動化設備進行ELISA操作,提高檢測效率。此外,實驗室還需配備超低溫冰箱(-80°C)用于樣本與試劑保存,以及離心機、微量移液器等輔助工具,確保檢測流程的標準化與安全性。
VHSV的檢測方法需根據樣本類型和檢測目的靈活選擇。細胞培養法是將疑似樣本接種于易感細胞系(如EPC或BF-2細胞),培養后觀察細胞病變,并通過免疫熒光或電鏡進一步確認病毒存在,該方法特異性高但耗時較長。RT-PCR法通過逆轉錄將病毒RNA轉為cDNA,再進行PCR擴增,通過凝膠電泳檢測特定基因片段,適用于快速篩查;qRT-PCR則可實時監測擴增過程,實現病毒載量的精確量化,靈敏度極高。血清學方法如ELISA,利用包被病毒抗原與血清抗體結合,通過酶促顯色反應判斷結果,適用于群體監測。對于產品檢測,常結合樣品前處理(如勻漿、離心)與上述方法,確保病毒顆粒或核酸的有效提取。所有方法均需設置陽性與陰性對照,并進行重復實驗以保障準確性。
證書編號:241520345370
證書編號:CNAS L22006
證書編號:ISO9001-2024001

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