Foxi3敲除小鼠先天性小兒畸形動物模型
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發布時間:2025-07-25 08:49:03 更新時間:2025-09-14 15:06:26
點擊:57
作者:中科光析科學技術研究所檢測中心
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| 資源中文名稱 | Foxi3敲除小鼠---先天性小兒畸形動物模型 |
|---|---|
| 資源英文名稱 | |
| 疾病概述 | 小耳畸形的病因目前還不完全明確,環境和遺傳因素是目前小耳畸形病因研究的重點。先天性小耳畸形在基因突變致病性研究方面還沒有闡明小耳畸形胚胎發育的機制。小耳畸形主要涉及胚胎發育期間第一和第二鰓弓的異常,主要表型涉及外耳發育異常。外耳的耳廓是由第一和第二鰓弓的逐漸融合形成的,在發育過程中第一和第二鰓弓之間是相互作用,兩弓之間的凹槽加深,形成外耳道,從胚胎的起源來分析,外耳的發育至少在一定程度上是由第一和第二鰓弓通過后腦的部分區域來介導的,后腦是鰓弓的神經嵴細胞的來源,在后腦的第四段基因突變可以導致外耳的發育缺陷。 |
| 實驗動物背景信息 |
利用Cre/loxP重組系統的原理,進行基因敲除(knockout,KO),制備FOXI3敲除小鼠。小鼠的背景品系是C57BL/6。 |
| 模型制作方法 |
(一)設計方案: Foxi3 forkhead box I3 [ Mus musculus (house mouse) ] Gene ID: 232077 Location: 6; 6 C1 Exon count: 2
(二)根據基因信息選擇靶點,合成sgRNA targeting site 1: tcccaggtataagagacg cgg M-FOXI3-sgRNA-UP1 5’TAGGtcccaggtataagagacg M-FOXI3-sgRNA-DOWN1 5’aaacCGTCTCTTATACCTGGGA targeting site 2: atcgctcctcagacttga tgg M-FOXI3-sgRNA-UP2 5’TAGGatcgctcctcagacttga M-FOXI3-sgRNA-DOWN2 5’aaacTCAAGTCTGAGGAGCGAT (三)顯微注射 1,超數排卵:15只3-4周齡C57雌鼠注射激素進行超排。 2,受精卵注射:取約150枚受精卵進行注射。 3,雄鼠結扎:制作30只8周齡輸精管結扎的ICR雄鼠。 4,受體鼠制備:8-10周齡ICR與結扎的ICR雄鼠交配后選取見栓的雌鼠。 5,胚胎移植:將注射后的受精卵移植到受體鼠輸卵管壺腹部(移植一次, 150枚卵,5只受體鼠)。 (四)顯微注射基因型鑒定 1,剪尾編號:出生7-10天的乳鼠,剪取腳趾和尾尖進行編號及取材。 2,基因組DNA提取: 使用全式金(Transgen)公司的基因組DNA提取試劑盒(EE101-12)提取基因組DNA 3,PCR檢測:根據序列信息設計檢測引物(上海英濰捷基) M-FOXI3-ko-s 5’CAAATAAGTAGTCAATCCACTCAAACG 61.4℃ M-FOXI3-ko-a 5’TCCCACCCTTAACTCCAATGAC 62.3℃ M-FOXI3-wT-s 5’GGGCTGATTGATCTCTGAGTTC 60.2℃ M-FOXI3-wT-A 5’AGGTGCTGAGGAAAGTGTTGAG 60.8℃ M-FOXI3-ko-s&A: TM=61℃ KO 603bp M-FOXI3-wt-s&A: TM=60℃ WT 496bp PCR反應體系及擴增程序(TaKaRa RR042A) 4,反應體系: |
證書編號:241520345370
證書編號:CNAS L22006
證書編號:ISO9001-2024001

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